孔板中细胞怎么传代，细胞传代在培养瓶分布不均匀有什么好方法解决
来源：整理 编辑：八论文 2023-06-27 19:58:29
1，细胞传代在培养瓶分布不均匀有什么好方法解决
细胞传代密度均匀，有以下3点比较重要（齐氏生物推荐参考丁香通网友回答） 1.尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶润洗一遍（25cm2培养瓶或6孔板），弃掉胰酶，37度消化2-3分钟或室温消化5min左右，镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够，延长消化时间。我见过有些刚进实验室的师弟师妹，一上来就加1-2ml胰酶，结果细胞团大片脱落，虽然有后续吹打步骤，但我觉得效果不佳。至于难消化的细胞，怎么掌握分寸，还待自己摸索或其他战友分享。2.在以上基础上，我觉得细胞吹匀，这步比上述提到的十字移动等更为重要。如传代1:4 ,可以收集所有细胞至离心管，加入培养液重悬混匀，吸管缓慢吹打20-30次，可配合水平摇晃离心管。3.此外我觉得培养液的量可能也会有讲究，如6孔板中你最终加入2ml细胞悬液，尤其像这样的小面积培养皿，液体表面有张力，细胞易于聚集在中间，所以我一般6孔板再加1ml以消除影响，吸管缓慢吹打15-20次左右继续混匀。
2，养细胞细胞12孔板的传板怎么做
养细胞细胞12孔板的传板怎么做总结下各种孔板细胞接种量仅供参考细胞培养瓶（板）生长面积容量与细胞数（大约）96孔板 4~5X104 35mm培养皿 1X106 48孔板 1.3X105 60mm培养皿 2.6X10624孔板 2.5X105 100mm培养皿 7X10612孔板 5X10 5 150mm培养皿 1.8X1076孔板 1.2X106细胞瓶面积 容量 工作体积 细胞数目612.5cm2 25ml 2ml 5X10 525cm2 50ml 5ml 1X10 6835cm2 75ml 10ml 2X10 675cm2 250ml 15ml X10 6150cm2 700ml 40ml 1.1X10 7补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
3，20211016 细胞传代
目前86细胞状态尚可，可用于后期转染试验，48小时前转染细胞，细胞按照50%铺板，24小时后转染，细胞密度约60%，转染后6小时，细胞密度感觉80%，未换液，24小时后直接传代每个6孔板一个孔到新的6cm培养皿，结果48小时后细胞密度仍不到50%。继续培养至明日-72小时，或更长时间提蛋白。 CCK-8以梯度铺板，分别为1/4-1/8-1/16，今日可进行初步测量，12孔板加入180ul无血清培养基和20ul cck-8，培养2小时，每孔分成2*95ul吸取加入96孔板，获得相对基线数据（实际为转染48小时） 平板克隆试验，目前认为day1，预计10-26日开始获得初步结果，拭目以待。 目前CAT与CAT-M的单克隆中，前者状态较好，目前有大量存货，今日继续培养，切记不要过满。 CAT-M始终状态差，现手中有一皿状态较好细胞，一会仔细传代，避免传代比例过高或过低，除非有特殊作用，否则传代按照1:2-1:4，注意保种！ 因为CAT-M状态差，现转染ERHP4荧光探针的CAT-M单克隆状态也非常差，不建议继续培养，预计近期CAT-M培养成功后重新铺板，感染病毒。 J-Chain病毒感染单克隆细胞状态极差，现在考虑全部细胞均采用6cm皿感染，先在6孔板生长到80%，传代到6cm皿，贴壁24小时后进行病毒感染，12小时换液，24小时传代到10cm皿。 目前培养经验为，15%FBS对于UC细胞较为合适，可以考虑升级到20%FBS进行培养，以增加细胞生长速度和状态。细胞消化时间目前发现try润洗一遍后PBS冲洗，再用Try消化9分钟，仍有20%左右细胞无法从培养皿中消化下来，考虑将细胞消化时间增加为10分钟。 目前细胞已冻存，可充分培养用于试验。BBA与ER的课题需要快速开始，避免消耗太长时间。 目前手中动物给予充分的恢复时间，好生保护，在细胞试验完成后尽快开始功能学试验。 当前设计很多实验同时做，但收效较差，宜保证重要试验如期完成，做好充分规划。在既定时间拿到数据，解决关键问题。今年一定要完成课题并投出文章。 死命令：7点出门，8点回，60天完成任务。
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